тавсифи кӯтоҳ:
2.1. Тайёр кардани SDE Ризомҳои SD ҳамчун алафи хушк аз Hanherb Co. (Гури, Корея) харида шудаанд. Маводҳои растанӣ аз ҷониби доктор Го-Я Чой аз Донишкадаи тибби шарқии Корея (KIOM) ба таври таксономӣ тасдиқ карда шуданд. Намунаи ваучер (рақами 2014 SDE-6) дар гербарияи Кореяи Захираҳои гиёҳии стандартӣ нигоҳ дошта шуд. Ризомҳои хушкшудаи SD (320 г) ду маротиба бо 70% этанол (бо рефлюкс 2 соат) истихроҷ карда шуданд ва сипас дар зери фишори паст консентратсия карда шуд. Нашр филтр карда, лиофилизатсия карда шуда, дар ҳарорати 4°С нигоҳ дошта мешавад. Ҳосили истихроҷи хушк аз маводи ибтидоии хом 48,13% (в/в) буд.
2.2. Таҳлили миқдории баландсифати моеъи хроматография (HPLC). Таҳлили хроматографӣ бо системаи HPLC (Waters Co., Milford, MA, ИМА) ва детектори массиви фотодиод анҷом дода шуд. Барои таҳлили HPLC аз SDE, ибтидоӣ-O -стандарти glucosylcimifugin аз Институти пешбурди саноати тибби анъанавии Корея (Кёнсан, Корея) харида шудааст васек-О -глюкозилхамаудол ва 4′-O -β -D-глюкозил-5-O -метилвисамминол дар лабораторияи мо ҷудо карда шуданд ва тавассути таҳлилҳои спектралӣ, пеш аз ҳама аз ҷониби NMR ва MS муайян карда шуданд.
Намунаҳои SDE (0,1 мг) дар 70% этанол (10 мл) гудохта шуданд. Ҷудокунии хроматографӣ бо сутуни XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 мм, 5) анҷом дода шуд.μ m, Waters Co., Милфорд, MA, ИМА). Марҳилаи мобилӣ аз ацетонитрил (А) ва 0,1% кислотаи сирко дар об (B) бо суръати ҷараёни 1,0 мл/дақ иборат буд. Барномаи градиенти чандқадам ба таври зерин истифода шудааст: 5% A (0 дақиқа), 5–20% A (0–10 дақиқа), 20% A (10–23 дақиқа) ва 20–65% A (23–40 дақиқа) ). Дарозии мавҷи кашф дар 210–400 нм скан карда шуда, дар 254 нм сабт шудааст. Ҳаҷми сӯзандору 10,0 будμ L. Маҳлулҳои стандартӣ барои муайян кардани се хромонҳо дар консентратсияи ниҳоии 7,781 мг/мл (прим-O -глюкозилцимифугин), 31,125 мг/мл (4′-O -β -D-глюкозил-5-O - метилвисамминол) ва 31,125 мг/мл (сек-О -глюкозилхамаудол) дар метанол ва дар 4°С нигоҳ дошта мешавад.
2.3. Арзёбии фаъолияти зиддиилтиҳобӣДар Vitro 2.3.1. Фарҳанги ҳуҷайра ва табобати намуна Ҳуҷайраҳои RAW 264,7 аз коллексияи фарҳанги навъи амрикоӣ (ATCC, Manassas, VA, ИМА) гирифта шуданд ва дар муҳити DMEM, ки дорои 1% антибиотикҳо ва 5,5% FBS доранд, парвариш карда шуданд. Ҳуҷайраҳо дар атмосфераи намнокшудаи 5% CO2 дар 37 ° C инкубатсия карда шуданд. Барои ҳавасманд кардани ҳуҷайраҳо, миёнарав бо муҳити тару тозаи DMEM ва липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Сент-Луис, МО, ИМА) дар 1 иваз карда шуд.μ г/мл дар ҳузур ё набудани SDE (200 ё 400μ г/мл) барои 24 соати иловагӣ.
2.3.2. Муайян кардани оксиди нитрат (NO), простагландин E2 (PGE2), омили некрозии варамҳо-α (TNF-α ), ва истехсоли «Интерлейкин-6» (ИЛ-6). Ҳуҷайраҳо бо SDE коркард карда шуданд ва бо LPS барои 24 соат ҳавасманд карда шуданд. Мувофиқи тадқиқоти қаблӣ истеҳсоли NO тавассути чен кардани нитрит бо истифода аз реагенти Griess таҳлил карда шуд [12 ]. Секрецияи ситокинҳои илтиҳобии PGE2, TNF-α , ва IL-6 бо истифода аз маҷмӯаи ELISA (системаҳои R&D) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда муайян карда шуд. Таъсири SDE ба NO ва истеҳсоли ситокинҳо дар 540 нм ё 450 нм бо истифода аз Wallac EnVision муайян карда шуд.™ хонандаи микроплата (PerkinElmer).
2.4. Арзёбии фаъолияти AntiosteoarthritisДар Vivo 2.4.1. Ҳайвонот Каламушҳои наринаи Спраг-Доули (7 ҳафтаина) аз Samtako Inc. (Осан, Корея) харида шуда, дар шароити назоратшаванда бо давраи 12 соат равшанӣ/торик нигоҳ дошта шуданд. °C ва % намӣ. Каламушхо бо хуроки лабораторй ва об таъмин карда шудандад либитум . Ҳама расмиёти таҷрибавӣ мувофиқи дастурҳои Институти Миллии Тандурустӣ (NIH) анҷом дода шуданд ва аз ҷониби Кумитаи нигоҳубин ва истифодаи ҳайвоноти донишгоҳи Дежон (Деджон, Ҷумҳурии Корея) тасдиқ карда шуданд.
2.4.2. Индуксияи OA бо ВКД дар каламушҳо Ҳайвонҳо ба таври тасодуфӣ ҷудо карда шуданд ва пеш аз оғози тадқиқот ба гурӯҳҳои табобатӣ таъин карда шуданд ( барои як гурӯҳ). Маҳлули ВКД (3 мг/50μ L 0,9% намак) бевосита ба фосилаи дохили буѓуми зонуи рост зери наркоз бо омехтаи кетамин ва ксилазин ворид карда шуд. Каламушҳо ба таври тасодуфӣ ба чор гурӯҳ тақсим карда шуданд: (1) гурӯҳи шӯрбо бе тазриқи ВКД, (2) гурӯҳи ВКД бо тазриқи ВКД, (3) гурӯҳи бо SDE табобатшуда (200 мг/кг) бо тазриқи ВКД ва (4) ) гурӯҳи индометацин- (IM-) коркардшуда (2 мг/кг) бо тазриқи ВКД. Каламушҳо бо SDE ва IM 1 ҳафта пеш аз тазриқи MIA барои 4 ҳафта ба таври шифоҳӣ идора карда шуданд. Миқдори SDE ва IM, ки дар ин таҳқиқот истифода шудааст, ба онҳое, ки дар таҳқиқоти қаблӣ истифода шудаанд, асос ёфтааст [10 ,13 ,14 ].
2.4.3. Андозагирии тақсимоти вазнбардории Hindpaw Пас аз индуксияи ОА, мувозинати аслии қобилияти борбардории пойҳои пушти сар вайрон карда шуд. Барои арзёбии тағирот дар таҳаммулпазирии вазн як озмоишгари ғайри қобили кор (Линтон асбобҳо, Норфолк, Британияи Кабир) истифода шудааст. Каламушҳо бодиққат ба камераи ченкунӣ ҷойгир карда шуданд. Қувваи вазнбардорие, ки ба пои қафо расонидааст, дар тӯли 3 сония ба ҳисоби миёна ҳисоб карда шуд. Таносуби таќсимоти вазн аз рўи муодилаи зерин њисоб карда шуд: [вазн дар ќисми пушти рост/(вазн дар дасту пои рости рост + вазн дар пои чапи чап)] × 100 [15 ].
2.4.4. Андозагирии сатҳи ситокинҳои хуноба Намунаҳои хун дар 1500 г барои 10 дақиқа дар 4 ° C центрифуга карда шуданд; пас зардоб ҷамъоварӣ карда шуд ва то истифода дар -70 ° C нигоҳ дошта шуд. Сатҳи IL-1β , ИЛ-6, TNF-α , ва PGE2 дар хуноба бо истифода аз маҷмӯаҳои ELISA аз R&D Systems (Миннеаполис, MN, ИМА) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда чен карда шуданд.
2.4.5. Таҳлили миқдории RT-PCR дар вақти воқеӣ РНК-и умумӣ аз бофтаи буғумҳои зону бо истифода аз TRI reagent® (Сигма-Олдрих, Сент-Луис, МО, ИМА) гирифта шуд, баръакс ба cDNA транскрипсия карда шуд ва бо истифода аз маҷмӯаи TM One Step RT PCR бо SYBR сабз (Applied Biosystems) пурзӯр карда шуд. , Гранд Айленд, NY, ИМА). ПТР-и миқдорӣ дар вақти воқеӣ бо истифода аз системаи Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Гранд Айленд, NY, ИМА) анҷом дода шуд. Пайдарпаии ибтидоӣ ва пайдарпаии зондҳо дар Ҷадвали нишон дода шудаанд1 . Аликвотҳои cDNA-ҳои намунавӣ ва миқдори баробари cDNA GAPDH бо омехтаи мастери TaqMan® Universal PCR, ки дорои полимеразаи ДНК мебошад, мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда (Applied Biosystems, Foster, CA, ИМА) тақвият дода шуданд. Шароити PCR 2 дақиқа дар 50 ° C, 10 дақиқа дар 94 ° C, 15 сония дар 95 ° C ва 1 дақиқа дар 60 ° C барои 40 давра буд. Консентратсияи гени мақсаднок бо истифода аз усули муқоисавии Ct (рақами давра дар нуқтаи байни қитъаи амплификатсия ва остона) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда муайян карда шуд.
Нархи FOB: 0,5 - 9,999 доллар / дона Миқдори ҳадди ақали фармоиш: 100 дона / дона Қобилияти таъминот: 10000 дона / дона дар як моҳ