Таҳлили хроматографӣ бо истифода аз системаи HPLC (Waters Co., Milford, MA, ИМА) ва детектори массиви фотодиод анҷом дода шуд. Барои таҳлили HPLC-и SDE, прим-O-глюкозилкимифугини стандартӣ аз Институти таблиғоти Корея оид ба саноати тибби анъанавӣ (Кёнсан, Корея) харидорӣ шудааст васония-О-глюкозилгамаудол ва 4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисамминол дар лабораторияи мо ҷудо карда шуда, бо истифода аз таҳлилҳои спектрӣ, асосан бо истифода аз ЯМР ва MS муайян карда шуданд.
Намунаҳои SDE (0.1 мг) дар этаноли 70% (10 мл) ҳал карда шуданд. Ҷудокунии хроматографӣ бо истифода аз сутуни XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 мм, 5) анҷом дода шуд.μм, Уотерс Ко., Милфорд, MA, ИМА). Фазаи мобилӣ аз ацетонитрил (A) ва 0,1% кислотаи сирко дар об (B) бо суръати ҷараёни 1,0 мл/дақ иборат буд. Барномаи градиенти бисёрқадамӣ чунин истифода шуд: 5% A (0 дақ), 5–20% A (0–10 дақ), 20% A (10–23 дақ) ва 20–65% A (23–40 дақ). Дарозии мавҷи ошкоркунӣ дар 210–400 нм скан карда шуд ва дар 254 нм сабт карда шуд. Ҳаҷми тазриқ 10,0 буд.μЛ. Маҳлулҳои стандартӣ барои муайян кардани се хромон дар консентратсияи ниҳоии 7.781 мг/мл (прим-O-глюкозилцимифугин), 31.125 мг/мл (4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисамминол) ва 31.125 мг/мл (сония-О-глюкозилгамаудол) дар метанол ва дар ҳарорати 4°C нигоҳ дошта мешавад.
2.3. Арзёбии фаъолияти зиддиилтиҳобӣДар озмоишгоҳ
2.3.1. Фарҳанги ҳуҷайра ва коркарди намунаҳо
Ҳуҷайраҳои RAW 264.7 аз Коллексияи Фарҳанги Намуди Амрико (ATCC, Manassas, VA, ИМА) гирифта шуда, дар муҳити DMEM, ки дорои 1% антибиотикҳо ва 5.5% FBS буд, парвариш карда шуданд. Ҳуҷайраҳо дар атмосфераи намнокшудаи 5% CO2 дар ҳарорати 37°C инкубатсия карда шуданд. Барои ҳавасманд кардани ҳуҷайраҳо, муҳити зист бо муҳити нави DMEM ва липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Сент-Луис, MO, ИМА) дар ҳарорати 1 иваз карда шуданд.μг/мл дар ҳузур ё набудани SDE илова карда шуд (200 ё 400μг/мл) барои 24 соати иловагӣ.
Ҳуҷайраҳо бо SDE коркард ва бо LPS барои 24 соат ҳавасманд карда шуданд. Истеҳсоли NO бо истифода аз реагенти Грисс мувофиқи як таҳқиқоти қаблӣ таҳлил карда шуд [1].12]. Ихроҷи ситокинҳои илтиҳобӣ PGE2, TNF-α, ва IL-6 бо истифода аз маҷмӯаи ELISA (системаҳои тадқиқотӣ ва рушд) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда муайян карда шуд. Таъсири SDE ба истеҳсоли NO ва ситокинҳо дар 540 нм ё 450 нм бо истифода аз Wallac EnVision муайян карда шуд.™хонандаи микропластина (PerkinElmer).
2.4. Арзёбии фаъолияти зидди остеоартритДар зинда
2.4.1. Ҳайвонот
Каламушҳои наринаи Sprague-Dawley (7 ҳафтаина) аз Samtako Inc. (Осан, Корея) харидорӣ шуда, дар шароити назоратшаванда бо давраи 12-соатаи рӯшноӣ/торикӣ нигоҳ дошта шуданд.°C ва% намӣ. Каламушҳо бо парҳези лабораторӣ ва об таъмин карда шуданд.бемаҳдудҲамаи расмиёти таҷрибавӣ мутобиқи дастурҳои Институтҳои миллии тандурустӣ (NIH) анҷом дода шуданд ва аз ҷониби Кумитаи нигоҳубин ва истифодаи ҳайвоноти донишгоҳи Дэҷон (Тэджон, Ҷумҳурии Корея) тасдиқ карда шуданд.
2.4.2. Индуксияи OA бо MIA дар каламушҳо
Ҳайвонҳо пеш аз оғози тадқиқот тасодуфӣ интихоб карда шуда, ба гурӯҳҳои табобатӣ таъин карда шуданд (барои ҳар як гурӯҳ). Маҳлули MIA (3 мг/50μ(л) маҳлули 0.9% шӯр мустақиман ба фазои буғуми зонуи рост таҳти наркоз бо омехтаи кетамин ва ксилазин ворид карда шуд. Каламушҳо ба таври тасодуфӣ ба чор гурӯҳ тақсим карда шуданд: (1) гурӯҳи шӯр бо тазриқи MIA, (2) гурӯҳи MIA бо тазриқи MIA, (3) гурӯҳи табобатшуда бо SDE (200 мг/кг) бо тазриқи MIA ва (4) гурӯҳи табобатшуда бо индометасин- (IM-) (2 мг/кг) бо тазриқи MIA. Каламушҳо 1 ҳафта пеш аз тазриқи MIA ба муддати 4 ҳафта бо SDE ва IM ба таври шифоҳӣ истеъмол карда шуданд. Миқдори SDE ва IM, ки дар ин таҳқиқот истифода шудааст, ба онҳое, ки дар таҳқиқоти қаблӣ истифода шудаанд, асос ёфтааст [].10,13,14].